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Oct 03, 2023

対象を絞った全体的な

Edizione di biologia della comunicazione

Communications Biology volume 6、記事番号: 619 (2023) この記事を引用

メトリクスの詳細

モザンビークは、世界中のマラリア死亡者数の半数以上を占めるアフリカ4カ国の1つですが、この国の原虫の遺伝構造についてはほとんどわかっていません。 私たちは、モザンビークの7つの州で2015年と2018年に収集された2251のマラリア感染血液サンプルに対して熱帯熱マラリア原虫のアンプリコンと全ゲノム配列決定を実行し、抗マラリア薬耐性マーカーの遺伝子型を特定し、ゲノムワイドのマイクロハプロティを使用して原虫の集団構造を調査しました。 ここで、5%を超える頻度で観察された唯一の耐性関連マーカーは、pfmdr1-184F (59%)、pfdhfr-51I/59 R/108 N (99%)、および pfdhps-437G/540E (89%) であったことを示します。 スルファドキシン - ピリメタミン耐性に関連する pfdhfr/pfdhps 五重変異体の頻度は、2015 年の 80% から 2018 年の 89% に増加しました (p < 0.001)。野生型寄生虫よりも pfdhps 変異体の周囲のマイクロハプロタイプの予想されるヘテロ接合性が低く、関連性が高いことが示唆されています。最近のセレクションの。 pfdhfr/pfdhps 五重変異体も、北部の 72% から南部の 95% に増加しました (2018; p < 0.001)。 この耐性勾配には、北部の pfdhps-436 における突然変異の集中 (17%)、熱帯熱マラリア原虫感染の遺伝的複雑さの南から北への増加 (p = 0.001)、および地域分化のマイクロハプロタイプの特徴が伴っていました。 。 ここで特定された寄生虫の個体数構造は、抗マラリア介入や疫学調査の指針となる洞察を提供します。

モザンビークは世界でマラリアの感染者数が最も多い 10 か国の 1 つであり、2020 年には 1,020 万人の感染者が発生すると推定されています11。マラリアの伝播は国内で非常に不均一であり、北部では蔓延が高く、南部では伝播が非常に低いため、さまざまな対応が必要です。効果的な制御と潜在的な排除のための戦略2. アルテミシニンベースの併用療法（ACT）によるマラリア疾患の早期治療と、予防および予防のための抗マラリア薬の使用が、依然としてマラリア制御、そして最終的にはマラリア撲滅の鍵となります。 しかし、アルテミシニン 3 やパートナー薬剤 4、さらには化学予防に使用されるスルファドキシン ピリメタミン (SP) 5 に対する耐性により、マラリアの負担を軽減する世界的な取り組みが脅かされています 6。

抗マラリア薬に対する耐性のリスクを軽減し、管理するには、抗マラリア薬の有効性の監視が鍵となります4。 抗マラリア薬耐性の分子マーカーの同定は、耐性を確認し、傾向を監視し、早期警告信号を発するための標準化されたプロトコール6,7に従う治療効果研究を補完できる遺伝的アプローチにつながりました6。 アルテミシニンの場合、部分的な耐性（寄生虫除去の遅れ）は、pfkelch13 プロペラ領域の突然変異に関連しています 3,6。 大メコン川流域では、これらの変異の出現は、熱帯熱マラリア原虫アピコプラスト リボソームタンパク質 10 (pfarps10; PF3D7_1460900)、フェロドキシン (pffd、PF3D7_1318100)、クロロキン耐性トランスポーター (pfcrt ; PF3D7_0709000)、および多剤耐性 2 ( pfmdr2; PF3D7_1447900) 遺伝子8。 最近、検証された pfkelch13 変異 R561H がルワンダ 9 とタンザニア 10 で検出され、一方、A675V と C469Y はウガンダ 11 での寄生虫排除半減期の延長と関連していることがわかっています。

ACT パートナー薬剤に対する耐性の発現は、マラリアの治療において引き続き課題となっています4。 ピペラキンに対する耐性の増加は、遺伝子プラスメプシン 2 および 312 が関与する染色体 14 の一部の遺伝子増幅、およびカンボジアから分離された寄生虫における推定上のエキソヌクレアーゼ遺伝子 (pfexo、PF3D7_1362500) の一塩基多型と関連しています12。 多剤耐性トランスポーター 1 (pfmdr1) 遺伝子 (N86Y、Y184F、および D1246Y) の変異は、アルテスネート アモジアキンやアルテメテル ルメファントリンなどの複数の薬剤に対する感受性と関連していますが、完全には検証されていません 4,6。 pfcrt での K76T 変異は、他のコドン (C72S、M74I、N75E、A220S、Q271E、N326S、I356T、および R371I を含む) でのさまざまな変異セットとともに、クロロキン耐性に関連付けられています 4,6,14。 最後に、SP による臨床治療の失敗は、ジヒドロ葉酸還元酵素 (pfdhfr) の三重変異 (N51I + C59R + S108N) と組み合わせた、ジヒドロプテロ酸シンターゼ (pfdhps) の A437G および K540E 変異に関連していると考えられています15。 追加の pfdhps 変異 (S436A/C/F/H および A581G) は、SP 耐性のレベルを増加させることが示唆されています 16。

定期的に収集されたサンプルから薬剤耐性に関連する変異を特定することで、薬剤政策に情報を提供し、適切な薬剤レジメンを利用した介入を確実に行うことができます。 2003 年に単純なマラリア治療のためにクロロキンがアモジアキンと SP の組み合わせに置き換えられて以来、モザンビークの国内治療ガイドラインはさまざまな改訂を受けました 17。 2006年に、合併症のない熱帯熱マラリア原虫の第一選択治療としてアルテスネイト/SPを採用することにより、ACTが正式に導入された。 最も最近の変化は2009年に起こり、同国は公式の第一選択治療としてアルテメテル・ルメファントリンを導入し、アルテスネート・アモジアキンはアルテメテル・ルメファントリンが禁忌である場合のバックアップとして使用された。 SP による妊娠中の間欠的予防治療 (IPTp) は 2006 年に初めてこの国で実施され、すべての妊婦に無料で実施されました 18。 2014 年に国のガイドラインが更新され、世界保健機関の 3 SP 用量以上の推奨に合わせて全国的に実施されました。 2015 年の全国世帯調査では、IPTp-SP の国における接種率は 1 回接種で 51.4%、2 回接種で 34.2%、3 回以上で 22.4% であると報告されました19。 現在、この国は季節性（SP およびアモジアキン）および通年性（SP）マラリアの化学予防薬の使用を試験的に行っています。 モザンビークにおける抗マラリア薬耐性の分子マーカーの蔓延については、いくつかの研究で報告されている 14,20,21,22,23 が、寄生虫の遺伝構造全体を考慮した空間的および時間的分布の包括的な分析は存在しない。 この研究では、アンプリコンベースおよび全ゲノム配列決定、機械学習アプローチ、およびpfdhpに隣接するマイクロハプロタイプの関連性および多様性分析を使用して、抗マラリア薬耐性マーカーの空間的および時間的分布、熱帯熱マラリア原虫の地理的構造を記述しました。モザンビーク南部、中部、北部全域で2015年と2018年に収集されたサンプルにおける、寄生虫、およびpfdhps変異対立遺伝子の進化の歴史。

この研究に含まれた2,251個の熱帯熱マラリア原虫サンプルのうち、1,784個（79％）のサンプル（2015年から455個、2018年から1,329個、北部から308個、日本から440個）において、配列決定により少なくとも1つの耐性関連遺伝子型（対象となった11の遺伝マーカーのうち）が判明した。中央モザンビーク、および南モザンビークからの 1034;図 1 および補足表 1 ～ 3)。 これらのサンプルのうち、1,522 件はマラリアの臨床症例 (治療効果研究、医療施設調査、または事後調査) から、200 件は地域社会調査 (集団薬剤投与、横断的調査) から、そして 62 件は初回産前ケア訪問時の妊婦から得られました。 (補足表 1)。 全ゲノム配列は、品質フィルターを通過した合計 1452 (64%) のサンプルから得られました。

表は、国の 3 つの主要な地域ごとに、分析に含まれたサンプルの数を州ごと、年ごとに示しています。 州境は太線で示されています。 研究にデータを提供している特定の地区は色分けされています。 QGISで作成しました。

pfkelch13 の遺伝子型特定に成功した 1,429 個の熱帯熱マラリア原虫サンプルのうち、1,393 個は完全な野生型で、36 個 (2.5%) はアルテミシニン耐性に関連しない合計 32 個の非同義変異を示しました (表 1)。 コドン 537 (N537D) の変異がモザンビーク南部のサンプルで観察されました (2018)。 アルテミシニン耐性の遺伝的背景を構成する 6 つのアミノ酸のうち、pfcrt N326Y のみが変異を示し、1,637 株中 5 株 (0.3%) が混合遺伝子型を保有していました (表 2)。 同様に、ピペラキンに対する耐性に関連する pfexo のコドン 415 には変異は観察されませんでした (n = 1394)。 プラスメプシン 2/3 切断点は、524 個の熱帯熱マラリア原虫分離株のうち 2 個 (0.4%) で検出されました (表 2)。

pfcrt のコドン 72 (n = 1655)、74 (n = 1657)、75 (n = 1658)、76 (n = 1656) における変異、および pfmdr1 (n = 1605) のコドン 86 (n = 1605) および 1246 における変異1519) は存在しないか、5% 未満でした (表 2)。 対照的に、テストしたサンプルの59％（899/1536）はコドン184に突然変異を持っていました（534の純粋な突然変異体と365の混合遺伝子型;補足表4、5）。 州間または研究期間間で、この変異の保有率に統計的に有意な差は観察されませんでした（補足図1および補足表6〜8）。

pfdhfr のコドン 164、pfdhps のコドン 581 および 613 における変異は存在しないか、1% 未満でした (表 2)。 混合遺伝子型は、108、51、および59のpfdhfrコドンでは1〜2％の頻度で観察され、437および540のpfdhpsコドンでは5〜11％の頻度で観察されました（補足表5）。 これらの混合遺伝子型を除外した後、pfdhfr の全体的な変異頻度は 97% 以上でした (コドン 51 [1596/1638] で 97%、コドン 59 [1597/1625] で 98%、コドン 108 [1635/1649] で 99%) ）およびpfdhpsで88％以上（コドン437 [1289/1439]で90％、コドン540 [1242/1404]で88％;補足表6および補足図2）。 最も一般的な pfdhfr および pfdhps 対立遺伝子は、それぞれ三重変異体 (S108N/N51I/C59R; 99% [1548/1600]) および二重変異体 (A437G/K540E; 89% [1228/1377]) で、87% (1155) /1330）の五重変異体（補足表6）。 五重変異体の全体的な頻度は、主にカボで、2015年の80％[234/293]から2018年の89％[921/1037]に増加した（p < 0.001;図2a〜c、補足表7および補足データ1）。デルガド (40 ～ 72%、p < 0.001) およびガザ (90 ～ 100%、p < 0.001)。 同様の増加が三重 pfdhfr 変異体および二重 pfdhps 変異体でも観察されました (p < 0.001)。 5重変異体の頻度は、2015年（カボ・デルガドで40％、マプトで93％、p < 0.001）と2018年（カボ・デルガドで72％、マプトで95％、p < 0.001）の両方で北から南に増加しました。これはpfdhps二重変異体の違いによって引き起こされます（図2a〜c）。 多変量ロジスティック回帰分析により、地域 (北部、中部、南部) と期間 (2015 年と 2018 年) の両方が、pfdhfr/dhps 変異の相対的な存在量と独立して関連しており、北から南へ、および 2015 年から 2018 年にかけて増加したことが示されました (補足表) 8)。

モザンビークの7つの州における2015年と2018年の、pfdhfrの三重変異(a)、pfdhpsの二重変異(b)、およびpfdhfr/phdhpsの五重変異(c)を有する熱帯熱マラリア原虫分離株の頻度。 pfdhps ハプロタイプ 436/437/540 (d) については、さまざまな対立遺伝子の組み合わせの頻度が示されています (n = 1365)。 頻度は、混合遺伝子型を除外した後に計算されました。 ソファラのデータは 2015 年のみ利用可能で、イニャンバネとザンベジアのデータは 2018 年にのみ利用可能でした。誤差バーは、人口割合の 95% 信頼区間を表します。

pfdhps のコドン 436 (S436C/A/H/F) における変異の分布は、非常に顕著な地理的パターンを持っていました (図 2d および補足データ 1)。 混合遺伝子型を除外した後、カボ デルガドから得られた分離株の 17% (40/232、C が 6、F が 5、H が 4、A が 25) で 436 の変異が観察されましたが、わずか 0.6% (8 株) でのみ観察されました。 /1307）、国の他の地域からの分離株であり、二重の437/540突然変異背景と組み合わせることはありません（補足表9）。 したがって、カボ デルガドでは 3 つの異なる pfdhps ハプロタイプが観察されました。三重野生型 (S436/A437/K540; 26/203 [13%])、コドン 436 で変異型ですが、コドン 437 と 540 では野生型 (37/203 [13%]) 18%])、コドン 436 では野生型であるが、コドン 437 と 540 では変異型 (S436/A437G/K540E; 139/203 [68%])。 対照的に、S436 / A437G / K540E ハプロタイプは、国の残りの地域で優勢でした（1089/1162 [94%];補足表9）。 研究期間間でコドン 436 の変異頻度の変化は観察されませんでした (p = 0.371; 補足表 8)。

合計 8722 個のマイクロハプロタイプ遺伝子座が、全ゲノム配列を生成した 1438 サンプルからの局所アセンブリを介して再構築されました。 これらのうち、349 サンプルにはすべてのマイクロハプロタイプ遺伝子座の 50 パーセント未満のデータが含まれていたため (補足図 3a)、除外されました。 マイクロハプロタイプの 50% 以上のデータを持つ 1,089 個のサンプルからの 8,722 個のマイクロハプロタイプの予想ヘテロ接合性 (He) の中央値は 0.312 (四分位範囲 [IQR]: 0.196 ～ 0.498) でした。 分析された寄生虫集団では、マイクロハプロタイプの24パーセントが高い予想ヘテロ接合性（He > 0.5）を有し、366はHe > 0.75を有していた（図3aおよび補足データ1）。

長いタンデムリピート間の長さ 150 ～ 300 bp の領域からのマイクロハプロタイプが全ゲノム配列から再構成され、熱帯熱マラリア原虫の地理的構造を調べるために使用されました。 a 全ゲノム配列から抽出された 8722 個のマイクロハプロタイプ遺伝子座における予想されるヘテロ接合性の分布。 y 軸は、特定の予想されるヘテロ接合性のマイクロハプロタイプ遺伝子座の数を表します。 赤い線は分布の 75% パーセンタイルを示します。 最も多様な 25% の遺伝子座が集団構造分析の対象とされました。 b 155 の最も重要なマイクロハプロタイプの染色体の位置。地理的 (北-中央-南) 分類モデルに貢献します。 c 上位 25% パーセンタイルでヘテロ接合性が予想される遺伝子座のマイクロハプロタイプを考慮した、サンプルを地域 (北-中央-南; n = 1089) にグループ化した主座標分析。 d 上位 155 のマイクロハプロタイプを考慮して領域にグループ化されたサンプルを使用した主座標分析。分類のアウトオブバッグエラー率は 24.89% です。 e、f 遺伝的に異なるクローンの数で示される、2015年（e）および2018年（f）のモザンビークのさまざまな地域のサンプルの感染の複雑さ（COI）。 サンプルの地域割り当て: 北: C. Delgado; 中部: ソファラ、テテ、ザンベジア。 南部: ガザ、イニャンバネ、マプト。

最も多様な 25% のマイクロハプロタイプ遺伝子座 (n = 2181) が、州および地域レベルでのランダム フォレスト分析を使用した地理的分類の予測因子として評価されました。 このモデルはサンプルを州レベルで分類できませんでした (袋外エラー率 = 50.51%)。 ただし、袋外エラー率は地域レベルで 24.89% でした (北-中-南、図 3c、d、および補足表 10)。 袋外エラー率が最も低かったのは、北部と南部のサンプルを分類した場合（8%）であり、中央地域のサンプルを考慮した場合はより高い率でした（中南部では15.26%、北-中央では36.79%）。補足図。 4)。 155 個のマイクロハプロタイプを削除すると、モデルは精度の平均低下の分布の変曲点より下の地域分類に対する予測精度が失われるため (補足図 3b)、そのため最も関連性が高いと考えられました。 これらのマイクロハプロタイプの 31 パーセントは染色体 6 に位置し、残りの染色体における割合は 10% 未満でした（図 3b および補足データ 1）。

最も高い He を持つ 100 のマイクロハプロタイプから計算された熱帯熱マラリア原虫感染の宿主内全体の複雑さは 2 (IQR [1,2]) で、モノゲノム感染率は 47% (517/1090) でした。 2015 年の感染の複雑さ (COI) とモノクローナル感染の有病率は、モザンビークの 3 つの地域で同様でした (それぞれ p = 0.801 と p = 0.507)。 ただし、2018 年の COI 中央値は 3 つの地域間で異なり (p < 0.001)、南部 (1、IQR [1,2]) が最も低く、次に中部 (2、IQR [1,2])、北 (2、IQR [1,3])。 同様の傾向がモノゲノム感染症の有病率でも観察されました（南部で 51%、中部で 46%、北部で 35%、p = 0.005、図 3e、f、補足表 8、11、および補足データ 1）。 ）。

他の州と同様に、pfdhp に隣接するマイクロハプロタイプを使用して、カボ デルガドの変異対立遺伝子の進化の歴史を推測しました。他の州では二重変異体がほぼ固定に達していました (頻度は 80 ～ 100%)。 16 個のマイクロハプロタイプが遺伝子 pfdhps の周囲の 50 kb 領域に含まれており、そのうち 15 個は 8 つの遺伝子に含まれ、1 つは遺伝子間でした（補足図 5）。 これらの隣接するマイクロハプロタイプは、二重pfdhps変異体ハプロタイプ（常に野生型436コドンを伴う）を持つ寄生虫を残りの寄生虫から分離しました（図4a、bおよび補足データ1）。 pfdhpsに隣接する50 kb領域は、二重pfdhps変異体（n = 92、状態別同一性中央値[IBS] = 0.88、IQR[0.81-0.91]）間で、二重野生型間（n = 51、IBS中央値 = 0.68、IQR[0.62–0.76]; p < 0.001;補足図6)。 同様に、pfdhps に隣接するマイクロハプロタイプの He は、野生型対立遺伝子 (中央値 = 0.34、IQR[0.21-0.41]; p = 0.016) よりも二重変異体 (中央値 = 0.1、IQR[0.04-0.26]) で 60% 低かった。 .4c、補足表 12、および補足データ 1)、最近の選択と一致しています。

モザンビークにおける pfdhps 変異対立遺伝子の進化の歴史を評価するために、pfdhps に隣接する 16 のマイクロハプロタイプを使用して、状態による識別 (IBS) と予想されるヘテロ接合性 (He) を計算しました。 2015 年と 2018 年に観察されたカボ デルガドの dhps 対立遺伝子間の亜集団間 IBS マトリックスのヒートマップ (コドン 436、437、および 540 の野生型 [WT/WT/WT]: n = 20; コドン 436 の変異型)ただし、コドン 437 および 540 は野生型 [MUT/WT/WT]: n = 31; コドン 436 は野生型だが、コドン 437 および 540 は変異型 [WT/MUT/MUT]: n = 92)。 pfdhps の周囲の 50 kb 領域にある 16 個のマイクロハプロタイプを使用して、サンプル間のペアワイズ IBS を計算しました。 b 10000 回の反復後の t 分布確率的近隣埋め込み可視化、および c カボ デルガドから収集された寄生虫の pfdhps 周辺の 50 kb 領域にある 16 のマイクロハプロタイプ遺伝子座から計算された予想ヘテロ接合性。 中央値および四分位間 (IQR) He 値: 0.1、二重変異体の IQR (0.04 ～ 0.26)。 0.37、WT/WT/WTのIQR（0.2–0.47）。 MUT/WT/WT の場合は 0.28、IQR (0.13 ～ 0.4)。 長方形の下側、中央、上側のヒンジは、それぞれ分布の 25% 分位数、中央値、75% 分位数に対応します。

この研究は、モザンビークにおける抗マラリア薬耐性と遺伝子構造の熱帯熱マラリア原虫マーカーの全国規模の解決を提供し、治療と化学予防のための抗マラリア薬の使用について情報を提供するだけでなく、将来の介入の影響を研究するために使用することができます。 ゲノムデータは次の証拠を提供します。(1) pfkelch13 では非同義変異が観察されましたが、それらのいずれもアルテミシニン耐性と関連していません。 (2) ピペラキンおよびクロロキン耐性に関連する遺伝的変異は、2018年にはまれでした。 (2) 対照的に、pfdhfr/dhps 変異の頻度は北から南に増加し、マプト州ではほぼ固定に達しました。 (3) この空間的傾向には、熱帯熱マラリア原虫感染の遺伝的複雑さの南に向かうにつれての減少と、高度に多様なマイクロハプロタイプに基づく地域分離を可能にする地理的分化のシグナルが伴った。

モザンビークで調査された寄生虫集団では、pfkelch13 野生型のアルテミシニン感受性ハプロタイプが優勢であり、アルテミシニン耐性が検証された変異体はいずれも検出されませんでした6。 しかし、アフリカでの他の研究の結果と同様に、一連の 32 の稀な非同義変異が特定されました 24。 その中で、クリアランスの遅延と関連する可能性があると報告されている N537D 変異 24 が 1 つのサンプルで検出された一方、アフリカ起源の熱帯熱マラリア原虫で最も優勢な pfkelch13 変異 24 であるが、アルテミシニン耐性とは関連していない A578S は、1 つのサンプルで検出されました。 1429 個の遺伝子型が特定されたサンプルのうちの 4 個。 東南アジアにおける pfkelch13 変異の出現を予測することが判明したバックグラウンド変異 8 は、この研究では検出されませんでした。 同様に、ACT パートナー薬剤に対する耐性に関連する多型の強力な証拠はありません。 プラスメプシン 2/3 重複に関連するプラスメプシン 325 の遠位端内の切断点と、推定上のエキソヌクレアーゼ遺伝子のコドン 415 における一塩基多型の分析に基づくと、分析されたサンプルの 0.4% のみがピペラキン耐性の証拠を示しました12。 これは、分析されたサンプルの 1.1% でプラスメプシン 2 の複数のコピーが見つかったモザンビークでの以前の研究と一致しています 21。 アモジアキンに対する耐性とルメファントリンに対する感受性の増加に関連する、pfmdr1 のコドン 86 の変異 26,27 が、分析した 1,605 サンプル中 11 サンプルで検出されました。 寄生虫の 59% が 184 F pfmdr1 変異体を保有していましたが、この変異は in vivo 28,29 および in vitro 26 での抗マラリア効果との関連性が低いようです。 ただし、pfmdr1 マーカーは、ACT パートナー薬剤耐性との関連性が一貫していないため注意して考慮する必要があり 30、アモジアキンおよびルメファントリンに関連する強力な分子マーカーがまだ不足していることが指摘されています。

本研究は、SP耐性の分子マーカーに作用する進化の過程を明らかにした。 全体として、トリプル pfdhfr (99%)、ダブル pfdhps (89%)、および五重変異ハプロタイプ (87%) の高い頻度が観察され、2015 年から 2018 年にかけて北から南に増加しました。 pfdhps 変異体対立遺伝子周辺の 50 kb 領域のマイクロハプロタイプは、野生型対立遺伝子周辺よりも類似しており (IBS が高く)、多様性が低かった (予想されるヘテロ接合性が低い) ため、国内における二重変異体集団の最近の拡大が示唆されています 31。 pfdhfr/dhps エールの蔓延における地理的不均一性は、pfdhps-436 変異の異なる分布を伴い、この変異は国の北部 (カボ デルガド) でのみ 17% の頻度で検出され、二重 437 変異との組み合わせは決してありませんでした。 540 の変異ハプロタイプ。 コドン 436 の変化は、in vitro SP 耐性のレベルの上昇と関連しています 32 が、in vivo 耐性の証拠はそれほど明確ではありません 33。 北から南への pfdhps 変異の増加は、個人に感染する遺伝的に異なる寄生虫株の数の減少も伴い、マラリア伝播強度の低下を示しています 34。 最後に、pfdhps の変異パターンは、非常に多様なマイクロハプロタイプに基づく寄生虫集団の地域的分離とも一致しており、地理的構造を示唆しています。 地理的距離、地域間の遺伝子流動の障壁、資源の不平等な配分と安全保障問題による抗マラリア介入の適用範囲の違い35が、マイクロハプロタイプの地域分化に寄与した可能性があり、それが分子マーカーで観察される地理的パターンに影響を与えた可能性があるSP耐性のこと。 しかし、モザンビークは2009年に臨床管理のためのSPを放棄したため、大規模な使用がない場合にどのような選択力がpfdhfr/dhps変異体の蔓延を促進したのかは依然として不明である。 変異適応度コストを削減する代償機構36または不十分なプール燃料回収に対する感受性の高い寄生虫の増加37が、SP 薬剤の圧力がない場合の pfdhfr/pfdhps 変異体の増加に寄与した可能性があります。 しかし、これらは、pfcrt の変異がほぼ固定されていたモザンビークにおけるクロロキン感受性の回復に対する制限要因ではありませんでした 38。 IPTp やコトリモキサゾール 39,40 などの他の薬剤に対する SP の薬剤圧力への寄与は小さいと考えられます。なぜなら、対象となる人口は、特定の時点でモザンビークの全人口のごく一部に過ぎないからです。 最後に、マラリア伝播が最も低いモザンビーク南部では、抗マラリア免疫のレベルが低いことと、耐性ハプロタイプを切り離すための性的組換えも、SP耐性の分子マーカーの保持率が高いことに寄与している可能性がある41。 これらのパターンは薬物圧力による方向性選択と一致しているように見えますが、研究の性質上、近隣諸国の薬物政策の地域的影響などの他の要因を無視することはできません42。

この研究の結果は、公衆衛生にいくつかの影響を及ぼします。 まず、利用可能なすべての in vivo 有効性データ 7,43,44 と、2018 年に検証された kelch13 変異の欠如は、モザンビークにおける熱帯熱マラリア原虫の治療とマラリア伝播の減少に対するアルテミシニンの適切な有効性を示唆しています。 しかし、ルワンダとウガンダで最近報告されているように、検出された広範な稀な非同義変異は、アルテミシニン耐性の出現のための深い変異の貯蔵庫を提供する可能性があります45。 第二に、pfexo のコドン 415 に変異がないこと、および検出されたプラスメプシン 2/3 ブレークポイントの頻度が低いこと (0.4%) は、ACT パートナー薬としてのピペラキンの適切な性能を示唆しています。 しかし、東南アジアではピペラキン耐性が急速に出現して広がり、ジヒドロアルテミシニン-ピペラキン治療後の治療失敗率が高くなっているため、プラスムペシン2/3遺伝子の増幅は注意深く監視する必要があります12。 第三に、pfdhps および pfdhfr 五重変異体の保有率が高いにもかかわらず、分子マーカーと化学予防効果との関係の証拠が不足しているため、このデータは化学予防に SP を使用することを再確認します 5,46。 さらに、乳児および妊婦における SP 化学予防効果を低下させることが示唆されている pfdhps A581G 変異 47,48,49 は、分析された 1,490 サンプル中 3 サンプル (0.2%) でのみ検出されたため、モザンビークのIPTpのSP。 同様に、アモジアキンの有効性は、アフリカにおけるアモジアキンに対する臨床的に適切な耐性に必要であることが示唆されている、pfcrt の 72 ～ 76 の変異と pfmdr1 の 86Y ～ 184Y ハプロタイプの有病率が非常に低いため、季節性マラリアの化学予防として許容できる高い水準を維持する可能性が高い 50,51 。 第 4 に、pfcrt におけるクロロキン耐性マーカーの有病率が非常に低い (0.6%) こと、およびモザンビークにおけるその治療効果の回復の証拠 38 は、その化学予防活性と安全性プロファイルとともに、クロロキンが単独で役割を果たす可能性があることを示唆しています。または他の薬剤やツールと組み合わせて、集団レベルでの化学予防、または妊娠第 1 期の妊婦など現在保護されていない集団に対する化学予防を目的としています52。 第五に、地域的な個体群構造を示すマイクロハプロタイプは、モザンビークにおける大規模な寄生虫の流れや地理的起源の割り当てを特定するのに役立つ可能性があります。 しかし、州レベルでより詳細な個体群構造が欠如しているため、このアプローチにはいくつかの制限が課せられる可能性があり、対立遺伝子頻度の地域的な差異とは対照的に、寄生虫のペアワイズ関連性の違いを利用することでより適切に評価できる可能性があります53,54。 これらの非常に多様なマイクロハプロティは、伝播強度の変化を検出し、抗マラリア介入の有効性を監視するための寄生虫の遺伝的多様性指標を開発するのにも役立つ可能性があります 34。 第 6 に、この研究は、監視対象の分子パターンを説明するために、他の研究からの血液サンプルの二次分析の有用性も示しています。 そして最後に、モザンビーク国内における抗マラリア薬耐性の分子マーカーの不均一性は、単一の場所からの調査結果を外挿する場合には注意が必要であることを浮き彫りにしています。

この研究にはいくつかの制限があります。 第一に、評価された乾燥血液スポットは、さまざまな研究から得られた便宜的なサンプルを表しており、その結果、年齢、個人の臨床状態、免疫レベルや治療の摂取に影響を与える可能性のある感染の強さにおいて不均一性が生じます。 これらの要因の影響を定量化するにはさらなる研究が必要ですが、これらの不均一性はモザンビークのような国で見られるものを表しており、マラリア伝播の負担は北部では非常に高く、南部では非常に低いものまであります。 第二に、耐性ハプロタイプの頻度を計算するために野生型と耐性の混合感染を除外すると、耐性の推定値に偏りが生じる可能性があります55。 第三に、最近の選択のシグナルは、他の遺伝子のコード領域と重複するpfdhp周囲の50 kb領域のマイクロハプロタイプを使用して推定されたため、抗マラリア薬の使用によって引き起こされるもの以外の選択力を無視することはできません。 最後に、抗マラリア薬の治療効果と化学予防効果を推測する際には注意が必要であり、これらは患者獲得免疫、初期の寄生虫バイオマス、治療アドヒアランス、用量、薬剤の品質、薬物動態など、内因性寄生虫感受性以外の要因に依存します6。 ただし、分子マーカーに関する情報は耐性の追跡に重要な役割を果たしており、早期の警告信号を検出するために活用する必要があります56。 SP ベースの化学予防戦略を評価するには、化学予防有効性研究 57 と pfdhps 変異のモニタリングを組み合わせることが必要です。

結論として、この報告書は、モザンビークにおけるSP耐性の分子メーカーの増加、感染症の遺伝的複雑さの減少、および地理的分化の南北の遺伝シグナルを示している。 しかし、pfdhps における 581 個の変異の有病率が非常に低いことから、モザンビークにおける化学予防における SP の役割が再確認されています。 同様に、モザンビークではアルテミシニン耐性の分子シグナルは観察されませんでした。 これらの結果は、国のマラリア治療ガイドラインの変更に応じた熱帯熱マラリア原虫の進化を研究するためのベースライン データを提供します。 さらに、これらの発見は、モザンビークにおける薬剤耐性の出現と拡大を追跡するために、分子監視システムと治療および化学予防の有効性研究との統合を促進する。 これを達成するには、マラリア分子監視プログラムの持続可能性を確保するために、財政的支援と生成されたデータの適切な使用とともに、サンプリングと配列決定の取り組みにおける非効率性に対処することが必要です58。

この研究では、2015年（n = 724）と2018年（n = 1527）にモザンビークの7つの州の40地区から収集された2251のサンプルを分析しました（補足表1、2）：北部地域（カボデルガド）に1つ、中央部に3つ地域（ザンベジア、ソファラ、テテ）と南部の 3 つ（ガザ、イニャンバネ、マプト、図 1）。 乾燥血液斑は、2015 年と 2018 年に実施された 6 件のマラリア観察研究および臨床試験中に特定された熱帯熱マラリア原虫感染者から収集されました7、43、59、60、61。 2018 年に、2 つの医療施設の調査研究が、マプト、ザンベジア、カボ デルガド、イニャンバネ、ガザの外来サービスに参加する個人 (全年齢) を募集しました 59,60。 追加の 2 つの治療効果研究のサンプルには、2015 年にカボ デルガド、テテ、ソファラ、ガザ州で (迅速診断検査により) マラリアが確認された 5 歳未満の子供が含まれていました43、2018 年にカボ デルガド、テテ、ザンベジア、イニャンバネで行われた 7 ）。 5 番目の研究では、マラリア撲滅プロジェクト地域 61 を含むマプト州の地域ベースの横断調査（2015 年および 2018 年）61 を通じて、マラリア陽性の迅速診断検査を受けた全年齢の個人が特定されました。マグデ地区における大規模な麻薬投与キャンペーンと事後監視。 最後に、6番目の研究では、マプト州で実施された産前ケア調査を通じて、定量的リアルタイムPCRによって熱帯熱マラリア原虫感染が確認された、初めての産前ケア受診時の妊婦が特定された（2018年）62。 医療施設ベースのサンプリング場所は、公衆衛生や研究のニーズに応じて、CISM (Centro de Investigação em Saúde de Manhiça) または国立マラリア対策プログラムによって選択された地区または準地区の保健センターまたは州の病院でしたが、横断調査は地域社会で行われました。に基づいており、参加者はランダムに選択されました。 各研究のサンプリングに関する詳細情報は、関連する出版物で入手できます。 治療を施す前に、各患者から指を刺して濾紙上の乾燥血液スポット 50 μL を採取し、匿名のバーコードで識別し、シリカゲルとともに 4 °C で保存しました。

臨床人口統計データと血液サンプルは、すべての参加者、または 18 歳未満の場合は同伴の成人からの書面によるインフォームドコンセントと同意が得られた後にのみ収集されました。 すべての研究プロトコルは、モザンビーク国家健康生命倫理委員会によって承認されました。 この研究には、研究設計、研究の実施、データの所有権、知的財産、出版物の著者など、研究プロセス全体を通じて地元の研究者が参加しました。 この研究は、マラリアの分子監視の重要性に同意した地元のパートナーとの協力によって決定されたことから、地域に関連したものであると判断されました。 研究活動を実施する前に、協力者間で役割と責任が合意されました。 分子監視のためのゲノムおよび生物情報学ツールに関する地元研究者の能力構築に特に重点が置かれています。

DNA は、英国ヒンクストンにあるウェルカム サンガー研究所の MalariaGEN 研究所で、ハイスループット ロボット装置 (Qiagen QIAsymphony) を使用してサンプルから抽出されました 63。 寄生虫 DNA は選択的全ゲノム増幅を適用することによって増幅され、遺伝子型決定は SpotMalaria プラットフォームによって実行されました 63。 簡単に説明すると、最初の PCR を行って、遺伝子座特異的多重化プライマーを使用して寄生虫ゲノム内に目的の 190 ～ 250 bp アンプリコンを生成し、続いて 2 回目の PCR を行って、独自のサンプルレベルおよびプライマープール多重化アダプターを組み込みました。 単一の MiSeq レーンで複数のサンプルをシーケンスした後、固有の多重化アダプター ID を使用して配列をデプレックスし、修飾されたアンプリコン P. falciparum 参照ゲノムにアラインメントしました。 bcftools とカスタム スクリプト 63 を使用して分析された各バリアントの遺伝子型が呼び出されました。すなわち、pfkelch13 (BTB/POZ およびプロペラ ドメインに対応するコドン 349 ～ 726 の任意の変異)64、pfdhfr (コドン 51、59、108、164)15、pfdhps (コドン 436、437、540、581、613)16、pfcrt (コドン 72、73、74、75、76)4、6、14、pfexo (コドン 415)12、pfmdr1 (コドン 86、184、1246)13、アルテミシニン耐性の遺伝的背景（pfarps10 のコドン 127、128、pffd の 193、pfcrt の 326、356、および pfmdr2 の 484）8。 プラスメプシン 2 遺伝子の完全な重複を含むプラスメプシン 3 の遠位端内の切断点 (プラスメプシン 2/3 切断点) を検出するように設計されたアッセイを使用して、プラスメプシン 2/3 重複の結果生成されるハイブリッド配列を検出しました 25。

熱帯熱マラリア原虫のサンプルもウェルカム・サンガー研究所とカリフォルニア大学サンフランシスコ校で全ゲノム配列決定された。 簡単に言うと、短い配列リード (200 bp) は、Wellcome Sanger Institute の Illumina HiSeqX プラットフォームで生成されました 65。 カリフォルニア大学サンフランシスコ校では、選択的全ゲノム増幅 66 後に NEBNext Ultra II DNA Library Prep Kit を使用して調製されたバーコード付きライブラリーがプールされ、150 bp ペアエンド シーケンスを使用して Illumina NovaSeq 6000 システムでシーケンスされました。 リードはベース品質あたり最低 20 でフィルタリングされました。バリアント呼び出しはカスタム パイルアップ プログラムを実行することによって生成され、最小リード深度 10 と最小サンプル内周波数 5% になるようにフィルタリングされました。これらは、選択的全体を利用することによって生成されました。ゲノム増幅制御は既知の実験室株に対して実行され、すべての誤ったバリアントコールを除去します。

この分析は、抗マラリア薬耐性マーカーの空間的および時間的分布、熱帯熱マラリア原虫の地理的構造、pfdhps 変異対立遺伝子の進化の歴史を記述することを目的としました。 抗マラリア耐性マーカーを持つ寄生虫を媒介する感染症の頻度は、サンプリング場所と年に基づいて州レベルで推定されました。 コドンごとに、サンプルは野生型、突然変異、または野生型と突然変異の両方の対立遺伝子が検出された場合は混合として分類され、サンプルが有効な遺伝子型を生成できなかった場合は欠落していました。 混合遺伝子型を含まないサンプルは、ハプロタイプ再構築および下流の統計分析のために保持されました。 ローカル ハプロタイプ再構成ツール (Pathweaver67) を使用して、長いタンデム リピート間の長さ 150 ～ 300 bp の領域からマイクロハプロタイプを抽出しました。 マイクロハプロタイプは、10 bp を超えるホモポリマー/ジヌクレオチド反復、または 3 bp を超える長さの変動を含まず、少なくとも 2 つの一塩基多型を含むように選択されました 60。 マイクロハプロタイプ遺伝子座の 50% 以上が欠落しているサンプルは、その後の分析から除外されました。

遺伝子座での予想されるヘテロ接合性 (He) は、カスタム R コードを使用して \({{{{{{\rm{H}}}}}}}_{{{{{{\rm{e}}}}} として計算されました) }}=[\frac{n}{n-1}][1-\sum {p}^{2}]\) (式 1)、n はサンプル数、p は対立遺伝子頻度です。遺伝子座の各マイクロハプロタイプ対立遺伝子。 He の分散は次の式に従って計算されました: \(2(n-1)/{n}^{3}\{2(n-2)[\sum {\left(\right.{p}^{ 3}-(\sum {p}^{2})}^{2}]\}\) (式 2). 熱帯熱マラリア原虫感染の宿主内複雑さは、マルコフ連鎖モンテカルロ法を使用して計算されました。 He が最も高い 100 のマイクロハプロタイプ (R パッケージ MOIRE、https://github.com/EPPIcenter/moire)。感染の複雑さが 1 の場合、モノゲノム感染が考慮されました。地理的構造は、ランダム フォレスト分類を使用してテストされました68 (R パッケージ randomForest、 ntree = 2500) のマイクロハプロタイプについて、予測変数として上位 25 パーセンタイルに He が含まれ、結果として地理的位置 (州および地域) が使用されました。バランスの取れたトレーニング データセット (データの 75% に相当) が初期テストに使用され、テスト データセット (残りの 25% のデータ) を使用して、分類モデルの out-of-bag エラー率を計算しました。25% 未満の out-of-bag エラー率は、適度に良好な分類とみなされます。 分類の視覚化は、近接行列の主座標分析によって実行されました。 pfdhp に隣接する 50 kb 領域のマイクロハプロタイプを使用して、変異対立遺伝子の進化の歴史を推測しました。 集団構造は、R パッケージ Rtsne で 10000 回反復して計算されたマイクロハプロタイプの有無を考慮する t 分布確率的近傍埋め込みを使用して視覚化されました。 サンプル間の関連性は、\(\frac{1}{n}\mathop{\sum }\limits_{i=1}^{n}{Si}/{XiYi}\) (式 3) として計算されるペアワイズ IBS によって評価されました。ここで、n は遺伝子座の数、Si は遺伝子座 i のサンプルに共有されるマイクロハプロタイプ対立遺伝子の数、Xi と Yi はそれぞれサンプル X と Y の遺伝子座 i にあるマイクロハプロタイプ対立遺伝子の数です。 カイ二乗検定およびロジスティック回帰モデルを使用して、地域および研究期間間の耐性マーカーの頻度を比較しました。 個々のマイクロハプロタイプ遺伝子座における pfdhps ハプロタイプ間の He の違いは、各マイクロハプロタイプ遺伝子座で部分集団のラベルをランダムに 1000 回シャッフルする順列テス​​トによってテストされました 69。 クラスカル・ウォリス順位和検定は、集団間のHeとIBSの分布の比較に使用され、ペアワイズ比較での多重検定にはダン検定とボンフェローニ補正が使用されました。

この研究は、モザンビークの7つの州の40地区から収集された2,251のサンプルを分析しました。 これらのうち、配列決定により 1784 サンプルで少なくとも 1 つの耐性関連遺伝子型が生成され、統計分析に含まれました。 全ゲノム配列は、高品質フィルターを通過した合計 1452 サンプルから取得されました。 統計分析は、Stata バージョン 15.0 および R バージョン 4.1.2 で実行されました。 報告されたすべての p 値は両側性であり、0.05 未満の p 値は統計的有意性を示すとみなされました。

研究デザインの詳細については、この記事にリンクされている Nature Portfolio Reporting Summary を参照してください。

配列は、ヨーロッパ ヌクレオチド アーカイブ (ENA) にプロジェクト名 PRJEB2136 で、シーケンス リード アーカイブ (SRA) にバイオプロジェクト ID PRJNA910151 で寄託されています。 匿名化および制限されたデータセットは、対応する作成者に電子メールで送信することでデータ使用契約を完了した後、承認されたリクエストによって提供できます。 すべてのグラフのソース データは、補足データ 1 および Figshare (https://figshare.com/s/1920d5bad8268218b480 [図 3c] および https://figshare.com/s/464a6825e09691aec654 [図 3d]) に提供されています。

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分子分析のために血液サンプルを提供してくれた研究参加者、そしてデータとサンプル収集を手伝ってくれた臨床医や看護師に特に感謝します。 この研究は、ビルおよびメリンダ・ゲイツ財団 (INV-019032 および OPP1132226)、国立衛生研究所 (1R01AI123050)、カタルーニャ大学教育学部 (AGAUR; 2021SGR01517 および 2022FIB00148 SB フェローシップ) によって支援されました。 、スペインの科学革新省（PID2020-118328RB-I00）、マリー・スクウォドフスカ＝キュリー氏の下での欧州連合のHorizo​​n 2020研究革新プログラム（助成金890477）、米国大統領のマラリア・イニシアチブを通じた米国国際開発庁。 CISM はモザンビーク政府とスペイン国際開発庁 (AECID) によって支援されています。 また、MCIN/AEI/10.13039/501100011033 が資金提供する助成金 CEX2018-000806-S からの支援と、CERCA プログラムを通じたカタルーニャ州政府からの支援にも感謝します。 この研究は、マラリアの分子メカニズムに関するISGlobalのプログラムの一部であり、ラモン・アレセス財団から部分的に支援されています。 この出版物は、「Jacob CG et al.」に記載されている MalariaGEN SpotMalaria プロジェクトのデータを使用しています。 マラリアの制御と撲滅を支援するための大メコン川流域と南アジアにおける遺伝子監視。 eLife 2021;10:e62997 https://doi.org/10.7554/eLife.62997。 SpotMalaria プロジェクトは、Wellcome (206194, 090770) からの資金提供を受けて、MalariaGEN Resource Center によって調整されています。 著者らは、Wellcome Sanger Institute のサンプル管理、ジェノタイピング、シーケンシング、および情報学チームのスタッフ、および CISM および ISGlobal 検査室および診療部門のスタッフの貢献に感謝したいと思います。 全ゲノム配列データも、ノーマ・ネフと他の CZB ゲノミクスチームからの非常に有益なサポートを受けて、CZB 調査員としての BG の役割を通じて、チャン ザッカーバーグ バイオハブ (CZB) によって作成されました。 この報告書の調査結果と結論は著者によるものであり、必ずしも米国疾病管理予防センターまたは米国国際開発庁の公式コドンを表すものではありません。 資金提供者は、研究計画、データ収集、データ分析、データ解釈、またはこの原稿の執筆において何の役割も果たしていません。 責任著者は研究内のすべてのデータに完全にアクセスでき、出版に提出する決定に対して最終的な責任を負いました。

クレメンテ・ダ・シルバ、シモーネ・ボーネなどの著者も同様に貢献しました。

マニヒサ健康研究センター (CISM)、マプト、モザンビーク

クレメント・ダ・シルバ、シモーネ・ボーネ、アルリンド・チディマテンブエ、グロリア・マタンビッソ、アベル・ニャマ、エウセビオ・マセテ、リディア・ニャムスア、ベアトリス・ガラタス、ピーター・L・アロンソ、ピーター・エイデ、フランシスコ・ソテー、アルフレッド・マイヤー

ISGlobal、病院クリニック – バルセロナ大学、バルセロナ、スペイン

デバヤン・ダッタ、エドゥアルド・ロビラ＝ヴァルボーナ、パウ・システロ、アルナウ・プジョル、ベアトリス・ガラタス、カテリーナ・ギノヴァルト、アルフレド・マヨール

カリフォルニア大学医学部、HIV、ID、国際医療部門、EPPIcenter 研究プログラム、米国カリフォルニア州サンフランシスコ

アンドリュー・アランダ＝ディアス、ゼファニア・テッセマ、ブライアン・グリーンハウス

チャン・ザッカーバーグ・バイオハブ、サンフランシスコ、カリフォルニア州、米国

アンドレス・アランダ・ディアス

マサチューセッツ大学チャン医科大学、米国マサチューセッツ州ウースター

ニコラス・ハサウェイ

国立衛生研究所 (INS)、保健省、マプト、モザンビーク

アベル・ニャマ、ソニア・エノッセ、ピーター・エイド

世界保健機関、WHO 国事務所マプト、マプト、モザンビーク

エヴァ・デ・カルヴァーリョ

米国疾病管理予防センター、寄生虫病およびマラリア部門マラリア支部、米国ジョージア州アトランタ

エリック・ロジェ

米国大統領マラリア・イニシアチブ、米国疾病管理予防センター、寄生虫病およびマラリア部門マラリア支部、米国ジョージア州アトランタ

マテウシュ・M・プルシンスキー

クリントン・ヘルス・アクセス・イニシアティブ（モザンビーク、マプト）

ジェームズ・コルボーン

米国大統領マラリア・イニシアチブ、USAID、ワシントン DC、米国

ローズ・ザリガー

米国大統領マラリア・イニシアチブ、USAID、マプト、モザンビーク

アブチャハマ サイフォーディン

病院クリニック - バルセロナ大学、バルセロナ、スペイン

ペドロ・L・アロンソ

国家マラリア対策プログラム、保健省、マプト、モザンビーク

バルタザール・カンドリーニョ

スペイン疫学および公衆衛生研究コンソーシアム (CIBERESP)、マドリード、スペイン

アルフレッド・マイヤー

モザンビーク、マプトのエドゥアルド・モンドラーネ大学医学部生理科学科

アルフレッド・マイヤー

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原稿の初稿を執筆：AM、CdS、SB 実験室での作業と分子データの分析に技術サポートを提供：PC、AC、NH、BG、ST、ER フィールドワーク活動の調整：AN、BG、GM、LN、および AC バイオインフォマティクス分析を実行しました: DD および NH サンプルの由来となる元の研究の研究プロトコルを考案および設計しました: PA、FS、BC、EM、PLA、SE、CG、BG、EdC、BG、MMP、JC、AP 、AS、RZ、AM 結果の解釈に参加: AP、ER-V.、DD、AA-D.、AM 原稿にコメントを提供: AP、AN、ER-V.、CG、RZ、BG、 SB、BG、MMP、SB、BG、PLA、AA-D。 最終原稿をレビューして承認しました: すべて。

アルフレド市長への通信。

著者らは競合する利害関係を宣言していません。

Communications Biology は、この研究の査読に貢献してくれた Emanuel Heitlinger と他の匿名の査読者に感謝します。 主な編集者:Nis​​hith Gupta、Zhijuan Qiu、George Inglis。 査読ファイルが利用可能です。

発行者注記 Springer Nature は、発行された地図および所属機関の管轄権の主張に関して中立を保っています。

オープン アクセス この記事はクリエイティブ コモンズ表示 4.0 国際ライセンスに基づいてライセンスされており、元の著者と情報源に適切なクレジットを表示する限り、あらゆる媒体または形式での使用、共有、翻案、配布、複製が許可されます。クリエイティブ コモンズ ライセンスへのリンクを提供し、変更が加えられたかどうかを示します。 この記事内の画像またはその他のサードパーティ素材は、素材のクレジットラインに別段の記載がない限り、記事のクリエイティブ コモンズ ライセンスに含まれています。 素材が記事のクリエイティブ コモンズ ライセンスに含まれておらず、意図した使用が法的規制で許可されていない場合、または許可されている使用を超えている場合は、著作権所有者から直接許可を得る必要があります。 このライセンスのコピーを表示するには、http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ にアクセスしてください。

転載と許可

da Silva, C.、Boene, S.、Datta, D. 他標的ゲノム配列および全ゲノム配列決定により、モザンビークにおける熱帯熱マラリア原虫の薬剤耐性マーカーと遺伝子構造の南北分断が明らかになりました。 Commun Biol 6、619 (2023)。 https://doi.org/10.1038/s42003-023-04997-7

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受信日: 2022 年 12 月 28 日

受理日: 2023 年 5 月 30 日

公開日: 2023 年 6 月 8 日

DOI: https://doi.org/10.1038/s42003-023-04997-7

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